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GSH—ST测试盒(谷胱甘肽—S转移酶测试盒)   型号:A004

 

1、 测定意义:此酶存在机体各种组织中,以肝脏为最多,其功能可消除体内自由基和解毒双重功能,此酶活力的大小,可反映机体氧化能力的高低,并对肝脏的早期损伤及肝癌的早期诊断具有一定价值。

2、 测试方法:化学比色法。可测血清(浆)、组织、食物、药物中的GST的含量。

3、 测试所需仪器:721、722或751、752可见光分光光度计,恒温水浴箱,低速离心机 。

4、 规格:80T。

          
一、测定原理:

谷胱甘肽+1氯—2,4—二硝基苯GST  谷胱甘肽二硝基苯复合物+盐酸 (GSH+C6H3(NO22Cl)GST  C6H3(NO22GS+H++Cl- GST具有催化还原型谷胱甘肽(GSH)与1氯—2,4—二硝基苯(CDNB底物)结合的能力,在一定反应时间内,其活性低与高反应前后底物浓度的变化呈线性关系。 本实验通过检测GSH浓度的高低来反应GST活力的大小,GSH(底物)浓度降低越多则GST活力越大。
二、测试所需仪器设备: 可见光分光光度计、恒温水浴箱、离心机。  
三、样品前处理: 1、  50倍稀释的溶血液的配制:取肝素抗凝全血20ml,以蒸馏水稀释至1ml,混匀,放置5分钟进行测定。 配制好的溶血液要在1小时内测定完,否则影响酶活力;抗凝全血若当天来不及测定可放冰箱4℃保存,2~3天内酶活力变化不大。  2、组织匀浆、线粒体、微粒体等的制备见实验方法学部分。 3、血清或血浆可以直接取样。
四、血浆(清)的测定: 1、酶促反应:

  测定管(酶管) 对照管(非酶管)
基质液    (ml) 0.3 0.3
血清(浆)(ml) 0.1  

混匀,37℃水浴30分钟

试剂二  (ml) 2 2
血清(浆)(ml)   0.1

混匀,3500~4000转/分,离心10分钟,取上清液作显色反应。  
2、显色反应:
  空白管 标准管 对照管* (非酶管)  测定管 (酶管)
试剂二(ml) 2      
20mmol/L GSH标准品(ml)   2    
上清液(ml)     2 2
试剂三(ml) 2 2 2 2
试剂四(ml) 0.5 0.5 0.5 0.5
混匀,室温放置15分钟,1cm光径,蒸馏水调零,412nm处比色。

   
* 对照管可以只做2~3管,特别精细的实验则每管都需做对照管

3、(1)定义:

      规定每毫升血清(浆)在37℃反应1分钟,扣除非酶促反应, 使反应体系中GSH浓度降低     

1mmol/L为一个酶活力单位。
(2)公式: * 从操作表中可看出反应液0.4ml(0.3ml基质液+0.1ml样本)加试剂二2ml共稀释6倍。       

六、组织匀浆的测定: 1、酶促反应:
  测定管(酶管) 对照管(非酶管)
基质液       (ml) 0.3 0.3
待测组织匀浆 (ml) 0.1  
混匀,37℃水浴10分钟(准确计时)
试剂二     (ml) 1 1
无水乙醇     (ml) 1 1
待测组织匀浆 (ml)   0.1
混匀,3500~4000转/分,离心10分钟,取上清液作显色反应。  
2、显色反应:
  空白管 标准管 对照管* (非酶管)  测定管 (酶管)
试剂二(ml) 2      
20mmol/L GSH标准品(ml)   2    
上清液(ml)     2 2
试剂三(ml) 2 2 2 2
试剂四(ml) 0.5 0.5 0.5 0.5
混匀,室温放置15分钟,1cm光径,蒸馏水调零,412nm处比色。

*对照管可以只做2~3管,特别精细的实验则每管都需做对照管

3、(1)定义:规定每毫克组织蛋白,在37℃反应1分钟扣除非酶促反应,使反应体系中GSH浓度降低1mmol/L为一个酶活力单位。

七、50倍稀释的溶血液的测定: 1、酶促反应:
  测定管(酶管) 对照管(非酶管)
基质液 (ml) 0.2 0.2
样品 (ml) 0.2  
混匀,37℃水浴30分钟
试剂二 (ml) 2 2
样品 (ml)   0.2
混匀,3500~4000转/分,离心10分钟,取上清液作显色反应。
2、显色反应:
  空白管 标准管 对照管* (非酶管)  测定管 (酶管)
GST2#(ml) 2      
  20umol/LGSH标准品(ml)   2    
上清液(ml)     2 2
试剂三(ml) 2 2 2 2
试剂四(ml) 0.5 0.5 0.5 0.5
混匀,室温放置15分钟,1cm光径,蒸馏水调零,412nm处比色。     
*对照管可以只做2~3管,特别精细的实验则每管都需做对照管
 
3 (1)定义:全血GST活力单位:规定每毫升全血在37℃反应1分钟,扣除非酶促反应,使反应体系中GSH浓度降低1mmol/L为一个酶活力单位