GSH—ST测试盒（谷胱甘肽—S转移酶测试盒） 型号：A004
1、 测定意义：此酶存在机体各种组织中，以肝脏为最多，其功能可消除体内自由基和解毒双重功能，此酶活力的大小，可反映机体氧化能力的高低，并对肝脏的早期损伤及肝癌的早期诊断具有一定价值。
2、 测试方法：化学比色法。可测血清（浆）、组织、食物、药物中的GST的含量。
3、 测试所需仪器：721、722或751、752可见光分光光度计，恒温水浴箱，低速离心机 。
4、 规格：80T。
一、测定原理：
谷胱甘肽+1氯—2,4—二硝基苯GST 谷胱甘肽二硝基苯复合物+盐酸 (GSH+C6H3（NO2）2Cl)GST C6H3（NO2）2GS+H++Cl- GST具有催化还原型谷胱甘肽（GSH）与1氯—2,4—二硝基苯（CDNB底物）结合的能力，在一定反应时间内，其活性低与高反应前后底物浓度的变化呈线性关系。 本实验通过检测GSH浓度的高低来反应GST活力的大小，GSH（底物）浓度降低越多则GST活力越大。
二、测试所需仪器设备： 可见光分光光度计、恒温水浴箱、离心机。
三、样品前处理： 1、 50倍稀释的溶血液的配制：取肝素抗凝全血20ml，以蒸馏水稀释至1ml，混匀，放置5分钟进行测定。 配制好的溶血液要在1小时内测定完，否则影响酶活力；抗凝全血若当天来不及测定可放冰箱4℃保存，2~3天内酶活力变化不大。 2、组织匀浆、线粒体、微粒体等的制备见实验方法学部分。 3、血清或血浆可以直接取样。
四、血浆（清）的测定： 1、酶促反应：
| |
测定管（酶管） |
对照管（非酶管） |
| 基质液 (ml) |
0.3 |
0.3 |
| 血清（浆）（ml） |
0.1 |
|
混匀，37℃水浴30分钟
| 试剂二 （ml） |
2 |
2 |
| 血清（浆）（ml） |
|
0.1 |
混匀，3500~4000转/分，离心10分钟，取上清液作显色反应。
2、显色反应：
| |
空白管 |
标准管 |
对照管* （非酶管） |
测定管 （酶管） |
| 试剂二（ml） |
2 |
|
|
|
| 20mmol/L GSH标准品（ml） |
|
2 |
|
|
| 上清液（ml） |
|
|
2 |
2 |
| 试剂三（ml） |
2 |
2 |
2 |
2 |
| 试剂四（ml） |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
0.5 | 混匀，室温放置15分钟，1cm光径，蒸馏水调零，412nm处比色。
* 对照管可以只做2~3管，特别精细的实验则每管都需做对照管。
3、（1）定义：
规定每毫升血清（浆）在37℃反应1分钟，扣除非酶促反应, 使反应体系中GSH浓度降低
1mmol/L为一个酶活力单位。
（2）公式： * 从操作表中可看出反应液0.４ml(0.3ml基质液+0.1ml样本)加试剂二２ml共稀释６倍。
六、组织匀浆的测定： 1、酶促反应：
| |
测定管（酶管） |
对照管（非酶管） |
| 基质液 (ml) |
0.3 |
0.3 |
| 待测组织匀浆 (ml) |
0.1 |
| 混匀，37℃水浴10分钟（准确计时）
| 试剂二 (ml) |
1 |
1 |
| 无水乙醇 (ml) |
1 |
1 |
| 待测组织匀浆 (ml) |
|
0.1 | 混匀，3500~4000转/分，离心10分钟，取上清液作显色反应。
2、显色反应：
| |
空白管 |
标准管 |
对照管* （非酶管） |
测定管 （酶管） |
| 试剂二（ml） |
2 |
|
|
|
| 20mmol/L GSH标准品（ml） |
|
2 |
|
|
| 上清液（ml） |
|
|
2 |
2 |
| 试剂三（ml） |
2 |
2 |
2 |
2 |
| 试剂四（ml） |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
0.5 | 混匀，室温放置15分钟，1cm光径，蒸馏水调零，412nm处比色。
*对照管可以只做2~3管，特别精细的实验则每管都需做对照管。
3、（1）定义：规定每毫克组织蛋白，在37℃反应1分钟扣除非酶促反应，使反应体系中GSH浓度降低1mmol/L为一个酶活力单位。
七、50倍稀释的溶血液的测定： 1、酶促反应：
| |
测定管（酶管） |
对照管（非酶管） |
| 基质液 (ml) |
0.2 |
0.2 |
| 样品 (ml) |
0.2 |
| 混匀，37℃水浴30分钟
混匀，3500~4000转/分，离心10分钟，取上清液作显色反应。
2、显色反应：
| |
空白管 |
标准管 |
对照管* （非酶管） |
测定管 （酶管） |
| GST2#（ml） |
2 |
|
|
|
| 20umol/LGSH标准品（ml） |
|
2 |
|
|
| 上清液（ml） |
|
|
2 |
2 |
| 试剂三（ml） |
2 |
2 |
2 |
2 |
| 试剂四（ml） |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
0.5 | 混匀，室温放置15分钟，1cm光径，蒸馏水调零，412nm处比色。
*对照管可以只做2~3管，特别精细的实验则每管都需做对照管。
3、 （1）定义：全血GST活力单位：规定每毫升全血在37℃反应1分钟，扣除非酶促反应，使反应体系中GSH浓度降低1mmol/L为一个酶活力单位 |