腺苷脱氨酶临床诊断试剂盒 型号:160ml
腺苷脱氨酶临床诊断试剂盒使用说明书
(酶法连续监测法、液体二试剂)
用 途:
本试剂盒适用于体外定量测定人血清、血浆、胸腹水或脑脊液中的腺苷脱氨酶(ADA)活性。
临床意义:
肝脏病—ADA活性是反映肝损伤的敏感指标,可作为肝功能常规检查项目之一,与ALT或GGT(r-GT)等组成肝酶谱能较全面地反映肝脏病的酶学改变。
血清中ADA活性的测定可①用于判断急性肝损伤及残留病变② 协助诊断慢性肝病③ 有助于肝纤维的诊断④ 有助于黄疸的鉴别
腺苷脱氨酶(ADA)在良恶性难辨的滲出液鉴别诊断上有重要价值。结核性胸腹水ADA活性显著增高,癌性胸腹水不增高。此外,脑脊液ADA检测可作为中枢神经系统疾病诊断和鉴别诊断的重要指标,结核性脑膜炎ADA活性显著增高,病毒性脑炎不增高,颅内肿瘤及中枢神经系统白血病稍增高。
原 理:
本方法原理反应方程式如下:
Adenosine + H2O ADA Inosine + NH4
NH4 + 2-Ketoglutarate + NADPH GLDH Glutamate + NADP + H2O
应用腺苷脱氨酶偶联谷氨酸脱氢酶反应连续监测法。腺苷脱氨酶酶解腺苷反应产生氨,再通过偶联谷氨酸脱氢酶的作用,氧化NADPH成为NADP,从而得以测定NADPH在340 nm处吸光度下降的速度,通过测量340nm处吸光度下降的速度,可以测算腺苷脱氨酶的活性大小。
试剂组成:
试剂Ⅰ NADPH 0.2 mmol/L
α-Ketoglutarate 15 mmo1/L
Glutamate Dehydrogenase 50000 U/L 试剂Ⅱ Adenosine 10 mmo1/L 试剂配制: 本试剂盒为液体双试剂,可直接上机使用。 如果受限于分析仪只能接受单试剂,则可以在测试前依比例(详见试验参数)混合试剂Ⅰ及试剂Ⅱ成为一混合剂。 试剂的稳定与贮存期: 自生产日期起,避光保存2-8℃可稳定一年。室温(20℃)至少稳定12小时。 样品要求: 血清、胸腹水或脑脊液。如果有需要可以进行抗凝处理。 试验参数与操作步骤: 温度 37 ℃ 波长 340 nm (主)& 450 nm (副) 比色杯光径 1.0 cm 测试方法 速率法 反应方向 负 予孵育 0.02 ml样品 + 0.2 ml试剂Ⅰ(或依比例混匀) 予孵育时间 5 分钟 启动反应 加0.05 ml试剂II (或依比例混匀) 延迟时间 1 分钟 测试时间 1.5 分钟 计算测试时间段每分钟平均吸光度的变化(△A/min)。 K值 -2170 计 算: △A/min×Tv×1000 ADA (U/L) = ε×Sv×L ε: 毫摩尔消光系数 NADPH = 6.22 Tv: 总反应体积(ml) Sv: 样品体积(ml) L : 比色杯光径(cm) 注意事项: 1.试剂和样品用量可因仪器不同,按比例增减。 2. 若反应吸光值变化大于0.20 A/min,须用生理盐水稀释样品,结果乘以稀释倍数。 3.如保存不当,试剂发现有混浊或吸光度在340 nm处 < 0.5 时,应弃用。 试剂性能: 线性范围: 0―600 U/L 灵敏度: 每分钟0.00046的光吸收值变化大约相当于1 U/L 准确度: 测定定值质量控制血清,测定值在定值±5%的范围以内. 精密度: CV ≤ 3% 参 考 值: 5~15U/L,各实验室需要自行订定预期参考值 仪 器: 全自动、半自动生化分析仪或可见光分光光度计
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